Nový koncept přípravy referenčních materiálů s heterozygotním genotypem pro molekulárně diagnostické účely

  • M. Beránek Ústav klinické biochemie a diagnostiky, Lékařská fakulta Univerzity Karlovy a Fakultní nemocnice Hradec Králové, Hradec Králové
  • M. Drastíková Ústav klinické biochemie a diagnostiky, Lékařská fakulta Univerzity Karlovy a Fakultní nemocnice Hradec Králové, Hradec Králové
  • V. Palička Ústav klinické biochemie a diagnostiky, Lékařská fakulta Univerzity Karlovy a Fakultní nemocnice Hradec Králové, Hradec Králové
Klíčová slova: syntéza genů, referenční materiál, klonování, trombofilní mutace, komutabilita

Abstrakt

Using the technique of enzymatic gene assembly we developed a compound heterozygous reference material for analysis of G20210A mutation in the Factor II and G1691A in the Factor V genes. The prepared clone contained both wild-type and mutant fragments of the genes. The DNA fragments carrying the mutations were inserted into the cloning vector in the inverse orientation relative to the wild-type ones. The clone performance was verified by DNA sequencing and by the allele discrimination real-time PCR methods. Our novel approach makes it possible to prepare a compound heterozygous reference material for any rare variants at biallelic polymorphic sites if analyzed by real-time PCR or other methods.

Publikované
2014-09-15
Sekce
Články